Kardiovaskulär Sjukdom

Kardiovaskulär sjukdom (CVD) är en benämning för sjukdomar i hjärta och blodkärl, ett komplext medicinskt område och och den vanligaste dödsorsaken i den industrialiserade världen. De två största manifestationerna, arteroscleros och venös trombos, är kända att orsakas av en komplex samverkan av flera miljö- och genetiska parametrar. Ett antal genetiska och miljöbetingade riskfaktorer har befunnits eller misstänks för att predisponera individer för kardiovaskulär sjukdom. Miljöfaktorer anses vara fysisk aktivitet, kost, alkohol- och drogintag, rökning och stress. Genetiskt betingad mottaglighet kan orsakas av mutationer och polymorfism i ett antal gener, ofta involverade i koagulationsprocessen, blodtrycksreglering och metabolism av lipider, glukos, homocystein eller järn.
Polymorfismer i gener involverade i dessa processer i kombination med en osund livsstil (t.ex. rökning, fettrik kost, fysisk inaktivitet) underbygger proppbildning på skador i kärlväggarna, den basala mekanismen bakom hjärtinfarkt (MI) och ischemisk stroke. En enskild genetisk defekt har sällan någon dramatisk effekt på utvecklingen av CVD. De flesta genvariationerna har mindre inverkan och individuella risker för kardiovaskulära sjukdomar relateras till kritisk ackumulering av skadliga polymorfismer i samverkan med ofördelaktiga miljöfaktorer. Bland markörkandidaterna för nedärvd CVD-risk återfinns variationer i generna för koagulationsfaktorer, faktors V (FV), faktor II (prothrombin), och XIII (FXIII), ß-fibrinogen (FGB), trombocytglykoprotein IIIa (GPIIIa), plasminogen aktivator inhibitor-1 (PAI-1), 5,10- metylenetetrahydrofolatreduktase (MTHFR), angiotensinkonverterande enzym (ACE), samt apolipoprotein B (Apo B) och E (Apo E).

RealFast™ Assay PTH 20210G>A PTH 20210G>A RealFast™ Assay är ett snabbt och exakt realtids-PCR-test för påvisande av 20210G>A mutation i den humana genen faktor II (FII) som kodar för koagulationsfaktorn protrombin (PTH). Denna punktmutation förknippas med ärftlig trombofili. Kitet är utvecklat för att identifiera patienter som löper risk för venös tromboembolism. Den kvalitativa analysen särskiljer de tre möjliga PTH 20210G>A genotyperna i ett DNA-extrakt: GG (normal), GA (heterozygot) eller AA (homozygot mutant). PTH, även känd som Faktor II, är ett proenzym i blodkoagulationskaskaden. Mutationen 20210G>A i 3' otranslaterade regionen på genen som ändrar polyadenyleringsställe. Detta resulterar i en ökning av mRNA-syntes som leder till högre plasmanivåer av protrombin, vilket i sin tur ger upphov till förhöjt trombin och därmed till överdriven bildning av fibrinkoagel. PTH 20210G>A mutation, som uppvisar en prevalens på 2% hos kaukasier, är den näst vanligaste genetiska riskfaktorn för venös tromboembolism. Heterozygota bärare utsätts för en 3-faldigt högre risk, homozygota bärare upp till 20-faldigt i jämförelse med icke-bärare. Individer med ytterligare riskfaktorer, liksom närvaron av andra genetiska anlag, övervikt, högt blodtryck, typ 2-diabetes, rökning eller intag av p-piller, är ännu mer benägna att venösa trombotiska händelser. Testet baseras på den fluorogena 5'nukleasanalysen, brukar även kallas TaqMan prober. Varje reaktion innehåller genspecifika primerpar för amplifiering av ett 110 bp fragment i FII-genen samt två dubbelmärkta, allelspecifika hydrolysprober som hybridiserar till målsekvensen av det amplifierade fragmentet. Närheten mellan den 5'-fluorescerande reporter och det 3'-utsläckande färgämnet på intakta prober hindrar reportern från att fluorescera. Under förlängningsfasen i PCR klyver 5 '- 3' exonukleasaktiviteten hos Taq DNA-polymeras 5'-fluorescerande reporter från den hybridiserade proben. Den fysiska separationen av fluoroforen från det utsläckande färgämnet ger en fluorescerande signal i realtid, som är proportionell mot den ackumulerade PCR-produkten. I normala prover hybridiseras den HEX-märkta PTH 20210G>A wild type proben till den komplementära strängen på genfragmentet. En stark fluorescenssignal detekteras i HEX-kanalen (556 nm) och ingen eller bara en baslinjesignal detekteras i FAM-kanalen (520 nm). I homozygota mutanta prover binder FAM-märkt PTH 20210G>A mutant prob till genfragmentet. En stark fluorescenssignal detekteras i FAM-kanalen och ingen eller endast en baslinjesignal detekteras i HEX kanalen. I heterozygota prover binder både wild type och mutanta prober till amplikoner och genererar intermediära signaler i båda kanalerna. Kiten innehåller reagens för 100 reaktioner i en slutvolym av 20 µl vardera

. Best.nr. Benämning Specifikation 7-120 PTH 20210G>A RealFast™ Assay Detekterar den näst vanligaste genetiska riskfaktorn i samband med venös tromboembolism