|
Farmakogenomik
PGX – KRAS och PGX-BRAF StripAssays
KRAS, BRAF och NRAS har en vital roll i
cellsignaleringen där epidermal growth factor receptor (EGFR) är
involverad. Muterade former är potenta inom onkogenesen vilket man har
funnit vid många cancertyper hos människa (t.ex. colorectalcancer,
pankreas-cancer, lungcancer, leukemi).
|
|
Modern cancerbehandling kan effektivt bekämpa metastaserad
kolorektalcancer. Bäst resultat uppnås när en specifik typ av cancer
matchas med mest lämplig terapi. Terapier mot metastaserad
kolorektalcancer med monoklonala antikroppar riktade mot EGFR (såsom
cetuximab och panitumumab) fungerar utomordentligt väl i många fall.
Men inte i alla.
|
Vissa mutationer i KRAS-genen förhindrar effekt med terapier som är
riktade mot EGFR. Epidermal tillväxtfaktor (EGF) aktiverar
cellproliferation genom bindning till EGF-receptor (EGFR). Detta
triggar en signaltransduktionsväg som inbegriper KRAS-proteinet.
Hämning av EGFR med monoklonala antikroppar förhindrar aktivering av
den relevanta signaltransduktionen precis i början av cykeln. Men det
fungerar bara om andra delar av den vägen inte är permanent aktiverade
oavsett EGF-signalen. Mutationer i KRAS kan orsaka denna typ av
aktivering som gör anti-EGFR terapier ineffektiva.
|
KRAS genen i människa kodar för en homolog av en transformationsgen
isolerad från Kirsten rat sarcoma virus. Likt andra inom ras gen
familjen (H-ras, N-ras), är KRAS proteinet ett 21 kD GTPas och utgör
en tidig aktör i många signaltranduktions-vägar.
|
Wildtype KRAS har en vital roll i den normala cellsignaleringsprosessen,
inklusive prolifiering, differentiering och åldrande. Muterade former
av genen är potenta inom onkogenesen vilket man har funnit vid många
cancertyper hos människa (t.ex. colorectalcancer, pankreas-cancer,
lungcancer, leukemi). Den mest kritiska regionen för KRAS genen för
onkologisk aktivering är mutationer i codon 12 och 13, som orsakar att
proteinet lagras i ett aktivt GTP-bundet tillstånd.
|
KRAS
mutationer har visat sig vara prediktiva för den respons som kan
åstadkommas vid cancerterapi med anti-EGFR monoklonala antikroppar, som
t.ex. panitumumab/Vectibix®, cetuximab/Erbitux® och tyrosinkinas
inhibitorer (erlitinib/Tarceva®, gefitinib/Iressa®).
|
Epidermal tillväxtfaktor (EGF) aktiverar cellproliferation genom
bindning till EGF-receptor (EGFR). Detta utlöser en
signaltransduktionsväg som omfattar KRAS-och BRAF-proteiner. Hämmande
EGFR med monoklonala antikroppar eller små molekyler terapeutika
förhindrar aktivering av den relevanta signaltransduktion precis i
början av cykeln. Men detta fungerar bara om andra delar av vägen inte
är permanent aktiverade oavsett EGF-signal. Mutationer i KRAS och BRAF
kan orsaka denna typ av aktivering som gör anti-EGFR terapier
ineffektiva.
|
Moderna cancerbehandlingar kan effektivt bekämpa sköldkörtelcancer och
melanom. De bästa resultaten uppnås när en specifik typ av cancer
matchas mot den bäst lämpade behandlingen. Identifiering av mutationer
i onkogener bidrar med väsentlig information för att identifiera en
effektiv metod.
|
Mutationer i BRAF-genen skulle kunna bidra till progressionen av
sköldkörtelcancer och melanom. BRAF kodar för ett serin/treoninkinas
som är en nyckelfaktor i mitogenaktiverat proteinkinas som omvandlar
signalerna från Ras onkogener. BRAF-mutationer har rapporterats i
sköldkörtelcancer, melanom och i vissa andra cancerformer. Vissa
mutationer öka kinasaktiviteten avsevärt och därigenom kan de
kontinuerligt aktivera transkriptionsmedierad proliferation, som stöd
för neoplastisk tillväxt.
|
|
KRAS Strip Assay® 5-590 detekterar:
Kodon 12: Ala,
Arg, Asp, Cys, Ile, Leu, Ser, Val
Kodon 13: Asp, Cys
KRAS XL Strip Assay® är en
uppdaterad och utökad version av KRAS och KRAS 12/13/61 StripAssay,
täcker mutationer i exon 2 (kodon 12/13), exon 3 (kodon 59/60/61) och
exon 4 (kodon 117/146). KRAS XL StripAssay" omfattar alltså alla tre
kritiska KRAS exoner som behöver utredas enligt gällande riktlinjer
från olika patologi sammanslutningar och läkemedelsföretag (Merck,
Amgen). KRAS XL Strip är avsett för att detektera:
Kodon 12: Ala,
Arg, Asp, Cys, Ile, Leu, Ser, Val
Kodon 13: Ala, Arg, Asp, Cys,
Ser, Val
Kodon 59: Glu, Gly, Thr
Kodon 60: Val
Kodon 61: Arg,
His, Leu, Lys
Kodon 117: Asn, Glu
Kodon 146: Thr, Pro, Val
|
KRAS XL Strip assay |
BRAF testning hamnade i focus när de
europeiska och amerikanska organen EMEA och FDA godkände Vemurafenib
(Zelboraf/Roche) för behandling av metastatiskt melanom. Vemurafenib
är en potent BRAF inhibitor och som är effektiv för patienter som bär
mutation i BRAF codon 600/601. Utöver Vemurafenib finns under
utveckling andra droger som riktas mot muterad BRAF, som t.ex.
Dabrafenib, som förväntas sättas på marknaden i en nära framtid.
Bland BRAF mutationer är V600E (tidigare benämnd V599E) särskilt ofta
iakttagen (>90%). BRAF V600E har också visats vara prediktiv för
respons vid behandling med vissa anti-EGFR monoklonala antikroppar
såsom t.ex. cetuximab/Erbitux och panitumumab/Vectibix, som godkänts
för terapi vid colorectalcancer. Studier har visat att verkan av
behandlingen med dessa antikroppar är begränsad till patienter med
BRAF wild type tumörer. BRAF V600E screening har dessutom beskrivits
som en kostnadseffektiv väg för att förenkla genetisk testning för
hereditär non-polyposis colorectalcancer (HNPCC).
BRAF
V600E StripAsssay® 5-570
V600E (c.1799T> A)
BRAF 600/601 StripAssay
5-560
V600A (c.1799T> C),
V600D (c.1799_1800TG> AT),
V600E
(c.1799T> A),
V600E (c.1799_1800TG> AA),
V600G (c.1799T> G),
V600K (c.1798_1799GT> AA),
V600M (c.1798G> A),
V600R
(c.1798_1799GT> AG),
K601E (c.1801A> G)
|
BRAF 600/601
StripAssay |
|
Muterade
alleler är detekterbara vid en förekomst av mindre än 1 % i en bakgrund
av wild-type.
Strip
Assay kiten innehåller bruksfärdigt reagens till 20 tester. Analysen kan
utföras i tre enkla steg på mindre än 6 timmar, manuellt eller
automatiserat.
|
|
Kiten är
baserade på revers-hybridisering av biotinylerade PCR produkter till en
parallellarray med allel-specifika oligonukleotider immobliserade på ett
membranteststrip. Denna strips assay har bruksfärdiga reagens för
genomförande av följande tre steg:
1.
PCR för amplifiering av mutant KRAS codon 12 och 13 och BRAF
V600E sekvenser i närvararo av wild-type supressor.
2.
Hybridisering av biotinilerade amplifierings-produkter till
oligonukleotid proberna på testremsan.
3.
Detektering av specifikt bundna mutanter av KRAS alleler och PCR
kontroll med en synlig enzymatisk färgreaktion.
En av två
möjliga reaktioner kan avläsas:
1.
Alla KRAS prober är negativa, kontrollen positiv: - ingen av KRAS
mutationerna finns närvarande.
2.
En eller flera KRAS prober positiva, kontrollen positiv: - en
eller flera KRAS mutationer förekommer. |
 |
|
Best.nr. |
Benämning |
Specifikation |
|
5-590 |
PGX-KRAS StripAssay |
KRAS Strip Assay, för högkänslig detektering av muterade
KRAS alleler |
|
5-680 |
PGX-KRAS XL StripAssay |
KRAS Strip Assay, för
högkänslig detektering av muterade KRAS alleler |
|
5-580 |
PGX-KRAS - BRAF
StripAssay |
KRAS Strip Assay, för
högkänslig detektering av muterade KRAS och BRAF alleler |
|
5-570 |
PGX-BRAF StripAssay |
BRAF Strip Assay, för
högkänslig detektering av muterad BRAF |
|
5-560 |
PGX- BRAF 600/601 StripAssay |
BRAF 600/601 Strip Assay, för högkänslig detektering av
muterade KRAS och BRAF alleler |
|
|
