Kardiovaskulär Sjukdom

Kardiovaskulär sjukdom (CVD) är en benämning för sjukdomar i hjärta och blodkärl, ett komplext medicinskt område och och den vanligaste dödsorsaken i den industrialiserade världen. De två största manifestationerna, arteroscleros och venös trombos, är kända att orsakas av en komplex samverkan av flera miljö- och genetiska parametrar. Ett antal genetiska och miljöbetingade riskfaktorer har befunnits eller misstänks för att predisponera individer för kardiovaskulär sjukdom. Miljöfaktorer anses vara fysisk aktivitet, kost, alkohol- och drogintag, rökning och stress. Genetiskt betingad mottaglighet kan orsakas av mutationer och polymorfism i ett antal gener, ofta involverade i koagulationsprocessen, blodtrycksreglering och metabolism av lipider, glukos, homocystein eller järn.
Polymorfismer i gener involverade i dessa processer i kombination med en osund livsstil (t.ex. rökning, fettrik kost, fysisk inaktivitet) underbygger proppbildning på skador i kärlväggarna, den basala mekanismen bakom hjärtinfarkt (MI) och ischemisk stroke. En enskild genetisk defekt har sällan någon dramatisk effekt på utvecklingen av CVD. De flesta genvariationerna har mindre inverkan och individuella risker för kardiovaskulära sjukdomar relateras till kritisk ackumulering av skadliga polymorfismer i samverkan med ofördelaktiga miljöfaktorer. Bland markörkandidaterna för nedärvd CVD-risk återfinns variationer i generna för koagulationsfaktorer, faktors V (FV), faktor II (prothrombin), och XIII (FXIII), ß-fibrinogen (FGB), trombocytglykoprotein IIIa (GPIIIa), plasminogen aktivator inhibitor-1 (PAI-1), 5,10- metylenetetrahydrofolatreduktase (MTHFR), angiotensinkonverterande enzym (ACE), samt apolipoprotein B (Apo B) och E (Apo E).

RealFast™ Assay MTHFR 1298A>C The MTHFR 1298A>C RealFast™ Assay är är ett snabbt och exakt realtids-PCR-test för påvisande av 1298A>C mutation i metylentetrahydrofolatreduktas (MTHFR)-genen. Mutationen förknippas med minskad enzymaktivitet, vilket leder till hyperhomocysteinemi och toxiska biverkningar av behandling med metotrexat. Kitet är utvecklat för att identifiera patienter som är predisponerade för att utveckla hjärt- och kärlsjukdomar eller intolerans mot metotrexat. Den kvalitativa analysen urskiljer tre möjliga MTHFR 1298A>C-genotyper i ett DNA-extrakt: AA (normal), AC (heterozygot) eller CC (homozygot mutant). Förhöjda nivåer av homocystein, en mellanprodukt i metioninmetabolismen, är en etablerad riskfaktor för åderförkalkning och arteriell trombos. Hyperhomocysteinemi leder slutligen till endoteldysfunktion med associerad trombocytaktivering och blodproppsbildning. Mild till måttlig form kan orsakas av homozygositet för en vanlig 677C>T punktmutation i den kodande regionen på MTHFR-genen. Den andra vanliga MTHFR mutationen 1298A>C bidrar även till minskad enzymaktivitet, särskilt vid samtidig förekomst av 677C>T. Homocysteinnivåer är betydligt högre hos individer heterozygota för båda jämfört med individer som bär endast heterozygot 677C>T mutation. Hyperhomocysteinemi kan påverka känsligheten för metotrexat och bidra till toxicitet, MTHFR är ett viktigt enzym för att upprätthålla cellulära pooler med folat. Således innebär homozygoti med 677C>T eller kombinerad heterozygot med 677C>T/1298A>C en betydligt högre risk för negativa biverkningar vid metotrexat medicinering. Testet baseras på den fluorogena 5'nukleasanalysen, brukar även kallas TaqMan prober. Varje reaktion innehåller genspecifika primerpar för amplifiering av ett 144 bp i MTHFR genen samt två dubbelmärkta, allelspecifika hydrolysprober som hybridiserar till målsekvensen av det amplifierade fragmentet. Närheten mellan den 5'-fluorescerande reporter och det 3'-utsläckande färgämnet på intakta prober hindrar reportern från att fluorescera. Under förlängningsfasen i PCR klyver 5 '- 3' exonukleasaktiviteten hos Taq DNA-polymeras 5'-fluorescerande reporter från den hybridiserade proben. Den fysiska separationen av fluoroforen från det utsläckande färgämnet ger en fluorescerande signal i realtid, som är proportionell mot den ackumulerade PCR-produkten. I normala prover hybridiseras den HEX-märkta 1298A>C wild type proben till den komplementära strängen på genfragmentet. En stark fluorescenssignal detekteras i HEX-kanalen (556 nm) och ingen eller bara en baslinjesignal detekteras i FAM-kanalen (520 nm). I homozygota mutanta prover binder FAM-märkt 1298A>C mutant prob till genfragmentet. En stark fluorescenssignal detekteras i FAM-kanalen och ingen eller endast en baslinjesignal detekteras i HEX kanalen. I heterozygota prover binder både wild type och mutanta prober till amplikoner och genererar intermediära signaler i båda kanalerna. Kiten innehåller reagens för 100 reaktioner i en slutvolym av 20 µl vardera

. Best.nr. Benämning Specifikation 7-170 MTHFR 1298A>C RealFast™ Assay Detekterar vanliga mutationer i metylentetrahydrofolatreduktas reduktasgenen