Kardiovaskulär Sjukdom

Kardiovaskulär sjukdom (CVD) är en benämning för sjukdomar i hjärta och blodkärl, ett komplext medicinskt område och och den vanligaste dödsorsaken i den industrialiserade världen. De två största manifestationerna, arteroscleros och venös trombos, är kända att orsakas av en komplex samverkan av flera miljö- och genetiska parametrar. Ett antal genetiska och miljöbetingade riskfaktorer har befunnits eller misstänks för att predisponera individer för kardiovaskulär sjukdom. Miljöfaktorer anses vara fysisk aktivitet, kost, alkohol- och drogintag, rökning och stress. Genetiskt betingad mottaglighet kan orsakas av mutationer och polymorfism i ett antal gener, ofta involverade i koagulationsprocessen, blodtrycksreglering och metabolism av lipider, glukos, homocystein eller järn.
Polymorfismer i gener involverade i dessa processer i kombination med en osund livsstil (t.ex. rökning, fettrik kost, fysisk inaktivitet) underbygger proppbildning på skador i kärlväggarna, den basala mekanismen bakom hjärtinfarkt (MI) och ischemisk stroke. En enskild genetisk defekt har sällan någon dramatisk effekt på utvecklingen av CVD. De flesta genvariationerna har mindre inverkan och individuella risker för kardiovaskulära sjukdomar relateras till kritisk ackumulering av skadliga polymorfismer i samverkan med ofördelaktiga miljöfaktorer. Bland markörkandidaterna för nedärvd CVD-risk återfinns variationer i generna för koagulationsfaktorer, faktors V (FV), faktor II (prothrombin), och XIII (FXIII), ß-fibrinogen (FGB), trombocytglykoprotein IIIa (GPIIIa), plasminogen aktivator inhibitor-1 (PAI-1), 5,10- metylenetetrahydrofolatreduktase (MTHFR), angiotensinkonverterande enzym (ACE), samt apolipoprotein B (Apo B) och E (Apo E).

RealFast™ Assay PAI-1 4G/5G PAI-1 4G/5G RealFast™ Assay är är ett snabbt och exakt realtids-PCR-test för påvisande av4G/5G deletion/insertion polymorfism i promotorregionen på den humana genen SERPINA1. I närvaro av ytterligare trombosrelaterade mutationer är 4G allelen en riskfaktor för arteriell och venös trombos liksom för graviditetskomplikationer. Den kvalitativa analysen skiljer de tre möjliga PAI-1 4G/5G genotyper i ett DNA-extrakt: 4G/4G (homozygot mutant), 4G/5G (heterozygot) eller 5G/5G (normal). Den humana SERPINA1 genen kodar för endoteliala plasminogenaktivatorinhibitor-1 (PAI-1), som är den huvudsakliga inhibitorn för fibrinolys. En enda guanosin deletion/insertion (4G/5G) i position -675 påverkar nivån av PAI-1-expression. Den homozygota 4G varianten associeras med en 25% högre plasma PAI-1 koncentration jämfört med 5G varianten. Höga PAI-1 nivåer korrelerar med reducerad fibrinolysaktivitet, och därmed med minskad koagelupplösning. Hos personer med ytterligare genetiska och förvärvade riskfaktorer utgör 4G-allelen en riskfaktor för att råka ut för venös tromboembolism eller hjärtinfarkt. Frekvensen av 4G-allelen är också betydligt högre hos kvinnor som drabbas av graviditetskomplikationer, tidiga missfall eller havandeskapsförgiftning. Testet baseras på den fluorogena 5'nukleasanalysen, brukar även kallas TaqMan prober. Varje reaktion innehåller genspecifika primerpar för amplifiering av ett 108 bp fragment av SERPINE 1-genen samt två dubbelmärkta, allelspecifika hydrolysprober som hybridiserar till målsekvensen av det amplifierade fragmentet. Närheten mellan den 5'-fluorescerande reporter och det 3'-utsläckande färgämnet på intakta prober hindrar reportern från att fluorescera. Under förlängningsfasen i PCR klyver 5 '- 3' exonukleasaktiviteten hos Taq DNA-polymeras 5'-fluorescerande reporter från den hybridiserade proben. Den fysiska separationen av fluoroforen från det utsläckande färgämnet ger en fluorescerande signal i realtid, som är proportionell mot den ackumulerade PCR-produkten. I homozygota 4G prover hybridiseras den HEX-märkta PAI-1 4G proben till den komplementära strängen av genfragmentet. En stark fluorescenssignal detekteras i HEX-kanalen (556 nm) och ingen eller bara en baslinjesignal detekteras i FAM-kanalen (520 nm). I homozygota 5G prover binder FAM-märkt PAI-1 5G proben till genfragmentet. En stark fluorescenssignal detekteras i FAM-kanalen och ingen eller endast en baslinjesignal detekteras i HEX kanalen. I heterozygota prover binder både 4G och 5G prober till amplikoner och genererar intermediära signaler i båda kanalerna. Kiten innehåller reagens för 100 reaktioner i en slutvolym av 20 µl vardera

. Best.nr. Benämning Specifikation 7-170 PAI-1 4G/5G RealFast™ Assay Detekterar genetisk riskfaktor för hjärt-kärlsjukdom och graviditetskomplikationer